- 產品描述
基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒 說明書
【預期用途】
基孔肯雅IgG抗體ELISA檢測試劑盒主要用于定性檢測人血清和血漿中抗基孔肯雅病毒的IgG抗體。
【實驗原理】
此試劑盒基于ELISA技術。包被板中包被了抗人IgG抗體,如果人血清或血漿中含有IgG時,則會與其特異性結合,洗板將未結合的物質洗去, 然后加入基孔肯雅抗原溶液,洗板洗去未結合的物質,然后加入鏈霉親和素和基孔肯雅抗體酶聯(lián)物。洗板后,加入TMB底物液,顏色變成藍色,加入終止液終止反 應,顏色由藍色轉為黃色,zui后用酶標儀在450nm處讀數(shù)。
【試劑組成】
包被板:12×8可拆卸,包被了抗人IgG抗體,密封在可重封鋁箔袋中
基孔肯雅溶液1:1瓶包含6mL的基孔肯雅抗原溶液,即用,白蓋
基孔肯雅溶液2:1瓶包含6mL的生物素化的基孔肯雅抗體,即用,藍色,白蓋
基孔肯雅IgM陽性質控:1瓶,1.5mL,黃色,即用,紅蓋
基孔肯雅IgM臨界質控:1瓶, 2mL,黃色,即用,綠蓋
基孔肯雅IgM陰性質控:1瓶,1.5mL,黃色,即用,藍蓋
樣本稀釋液: 1瓶包含100mL的即用緩沖液,用于稀釋樣本,pH7.2±0.2,黃色,白蓋
洗滌液:1瓶,包含50mL 20倍濃縮的緩沖液,(pH7.2±0.2)用于洗板,白蓋
鏈霉親和素結合液:1瓶包含6mL過氧化物酶結合的鏈霉親和素,即用,紅色,黑蓋
TMB底物液:1瓶包含15mL TMB,即用,黃蓋
終止液:1瓶包含15mL,即用,內含硫酸,0.2mol/l,紅蓋
【需要的設備和材料】
固定板
封板片
酶標儀(450/620nm)
37℃孵箱
洗瓶或自動洗板機
10~1000μL的移液器
漩渦混勻器
蒸餾水或去離子水
一次性試管
計時器
【儲存和穩(wěn)定性】
試劑在有效期內,儲存于2-8℃穩(wěn)定
【試劑準備】
洗滌液的準備
用雙蒸水稀釋洗滌液,例子:10ml洗滌液+190ml雙蒸水。稀釋好的洗滌液在室溫下5天內有效。
【樣本的采集和準備】
這個實驗中使用的樣本是人血清和血漿,如果實驗在樣本采集后的5天內進行,則需要儲存在2-8℃,否則,必須于-20℃到-70℃深度凍存。如果樣本是深度凍存的,在使用前,則需要充分混勻,避免反復凍融。
不推薦使用熱滅活的樣本
【樣本的稀釋】
將10μL樣本跟1ml的樣本稀釋液混勻,并用漩渦混勻器充分混勻。
【實驗步驟】
在開始試驗前,請仔細閱讀試驗說明。結果的可信度是依賴于嚴格地按照實驗說明來進行的,鋪板時zui少留1個孔為空白對照(A1)1個陰性質控孔(B1)2個臨界質控孔(C1+D1)1個陽性質控孔(E1)。開始試驗前,請將所有試劑都平衡到室溫
1. 吸取50μL的質控品和稀釋過的樣本到相應的孔中,留A1孔做空白對照孔
2. 封板
3. 在37±1℃下孵育1小時±5分鐘
4. 當孵育完成時,揭去封板片,棄去反應液,每孔300μL洗滌液,洗板3次,避免溢出。每孔浸泡的時間都必須>5秒,zui后拍板將殘留的液滴都拍去。
5. 吸取50μL基孔肯雅溶液1到除了空白對照孔的每個孔中,蓋板
6. 在室溫孵育30分鐘
7. 重復步驟4
8. 將基孔肯雅溶液2跟鏈霉親和素結合物混勻10分鐘
9. 吸取50μL基孔肯雅溶液2跟鏈霉親和素的復合物到除了空白對照孔的每個孔中,蓋板。
10. 室溫孵育30分鐘
11. 重復步驟4
12. 吸取100μL TMB底物液到每個孔中
13. 避光孵育15分鐘(精確)
14. 加入100μL終止液到每個孔中,與加TMB底物液時的間隔和順序都必須一樣
15. 用酶標儀在加入終止液后30分鐘內與450/620nm處檢測
【檢測】
調整酶標儀,以空白對照孔調零,以450nm處檢測所有孔的吸光度值。
【結果】
1. 檢測生效的條件
只有以下條件符合,檢測的結果才能認為的有效的
空白對照孔 吸光度值<0.100
陰性質控孔 吸光度值<臨界質控
臨界質控孔 吸光度值0.150-1.300
陽性質控孔 吸光度值>臨界質控
如果以上條件不符合的,那么試驗結果則是無效的,需要重新檢測
2. 結果的計算
臨界質控平均吸光度值的計算,例子:吸光度1:0.39;吸光度2:0.37
(0.39+0.37)/2=0.38
平均吸光度值為0.38
3. 結果的說明
樣本如果是比臨界值高出10%,則認定為陽性,
樣本如果是在臨界值上下10%之內,則認定為灰色區(qū)(推薦在2-4周之后再次檢測新鮮的樣本,如果樣本仍然是灰色區(qū),可以直接認為是陰性)
樣本如果是比臨界值低出10%,則認定為陰性
4. 結果的單位
病人樣本平均吸光度值×10 = U
臨界值
例子: 1.216×10 =32U
0.38
臨界值: 10 U
灰色區(qū):9-11 U
陰性: <9 U
陽性: >11 U
本譯文由廣州健侖生物科技有限和公司編譯僅供參考,詳情請以原文為準。
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