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利用PCR熒光探針法測非洲豬瘟ASFV的試劑盒

【廣州健侖生物科技有限公司】

非洲豬瘟（African Swine fever，ASF）是由非洲豬瘟病毒（African Swine fever virus，ASFV）感染家豬和各種野豬（非洲野豬、歐洲野豬等）引起一種急性、出血性、烈性傳染病。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，該病也是我國重點防范的一類動物疫情。其特征是發(fā)病過程短，最急性和急性感染死亡率高達100%，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱（達40~42℃），心跳加快，呼吸困難，部分咳嗽，眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物，皮膚發(fā)紺，淋巴結(jié)、腎、胃腸粘膜明顯出血，非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似，只能依靠實驗室監(jiān)測確診。 

ASFV病原簡介：

非洲豬瘟病毒是非洲豬瘟科非洲豬瘟病毒屬的重要成員，病毒有些特性類似虹彩病毒科和痘病毒科。病毒粒子的直徑為175－215納米，呈20面體對稱，有囊膜?；蚪M為雙股線狀DNA，大小170－190kb。在豬體內(nèi)，非洲豬瘟病毒可在幾種類型的細胞漿中，尤其是網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞和單核巨噬細胞中復(fù)制。該病毒可在鈍緣蜱中增殖，并使其成為主要的傳播媒介。

本病毒能從被感染豬之血液、組織液、內(nèi)臟，及其他排泄物中證實出來，低溫暗室內(nèi)存在血液中之病毒可生存六年，室溫中可活數(shù)周，加熱被感染病毒的血液55℃30分鐘或60℃10分鐘，病毒將被破壞，許多脂溶劑和消毒劑可以將其破壞。

易感動物

豬與野豬對本病毒都系自然易感性的，各品種及各不同年齡之豬群同樣是易感性，夢特哥馬利氏等（Montgomery）于1921年曾設(shè)法試驗白鼠、天竺鼠、兔、貓、犬、山羊、綿羊、牛、馬、鴿等動物，都未被感染成功，但是偉力合（Velho）于1956年報告，他曾盲目通過兔子26代后攻毒豬照樣致死。

ASFV傳播媒介：

非洲和西班牙半島有幾種軟蜱是ASFV的貯藏宿主和媒介。美洲等地分布廣泛的很多其他蜱種也可傳播ASFV。一般認為，ASFV傳入無病地區(qū)都與來自國際機場和港口的未經(jīng)煮過的感染豬制品或殘羹喂豬有關(guān)，或由于接觸了感染的家豬的污染物，胎兒，糞便，病豬組織，并喂了污染飼料而發(fā)生。發(fā)病率和死亡率最高可達100%。世界動物衛(wèi)生組織將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。1921年肯尼亞首次報道發(fā)生非洲豬瘟疫情，該病于上世紀60年代傳入歐洲，70年代傳入南美洲，2007傳入高加索地區(qū)和俄羅斯。2017年以來，俄羅斯遠東地區(qū)發(fā)生數(shù)起非洲豬瘟疫情。2018年我國沈陽市沈北新區(qū)沈北街道（新城子）五五社區(qū)發(fā)現(xiàn)*例病毒。   該病現(xiàn)主要在非洲、中東歐和高加索地區(qū)流行。病毒在我國已有出現(xiàn)。健康豬與患病豬或污染物直接接觸是非洲豬瘟最主要的傳播途徑，豬被帶毒的蜱等媒介昆蟲叮咬也存在感染非洲豬瘟的可能性。 [50]

2018年之前，中國沒有非洲豬瘟。分子流行病學(xué)研究表明：傳入中國的非洲豬瘟病毒屬基因Ⅱ型，與格魯吉亞、俄羅斯、波蘭公布的毒株全基因組序列同源性為99.95%左右。

“通常非洲豬瘟跨國境傳入的途徑主要有四類：一是生豬及其產(chǎn)品國際貿(mào)易和，二是國際旅客攜帶的豬肉及其產(chǎn)品，三是國際運輸工具上的餐廚剩余物，四是野豬遷徙。”

中國已查明疫源的68起家豬疫情，傳播途徑主要有三種：一是生豬及其產(chǎn)品跨區(qū)域調(diào)運，占全部疫情約19%；二是餐廚剩余物喂豬，占全部疫情約34%；三是人員與車輛帶毒傳播，這是當(dāng)前疫情擴散的最主要方式，占全部疫情約46%。

ASFV發(fā)病機理：

ASFV可經(jīng)過口和上呼吸道系統(tǒng)進入豬體，在鼻咽部或是扁桃體發(fā)生感染，病毒迅速蔓延到下頜淋巴結(jié)，通過淋巴和血液遍布全身。強毒感染時細胞變化很快，在呈現(xiàn)明顯的刺激反應(yīng)前，細胞都已死亡。弱毒感染時，刺激反應(yīng)很容易觀察到，細胞核變大，普遍發(fā)生有絲分裂。發(fā)病率通常在40%-85%之間，死亡率因感染的毒株不同而有所差異。高致病性毒株死亡率可高達90-100%；中等致病性毒株在成年動物的死亡率在20%-40%之間，在幼年動物的死亡率在70%-80%之間；低致病性毒株死亡率在10%-30%之間。

ASFV實驗室診斷

健侖生物科技設(shè)計的特異擴增引物快速設(shè)計體系（ASFV）：

該項目在前期篩選20余萬條RAA引物的基礎(chǔ)上，總結(jié)相關(guān)規(guī)律并建立了全新的RAA設(shè)計方案，并構(gòu)建了RAA引物設(shè)計模型。

通過這一模型，可快速進行特異性RAA引物的設(shè)計，并可以*避免非特異性擴增

突出優(yōu)點：

1.解決困擾基因擴增行業(yè)多年的污染問題

2.現(xiàn)場：隨時隨地進行基因擴增（世界

，突破傳統(tǒng)的檢測方法）
3.即時：現(xiàn)場檢測結(jié)果
4.便攜：單人操作，無需額外設(shè)備、3分鐘學(xué)會操作
5.快速：基因擴增5-15分鐘，全程30分鐘完成。（傳統(tǒng)檢測基因擴增時間：2小時）

此項技術(shù)已經(jīng)做過很多次試驗，對非洲豬瘟檢測有可行性。我們期待可以推薦到農(nóng)業(yè)部做實驗，認證一下實驗過程和結(jié)果。近年來國家對農(nóng)業(yè)政策的注重程度和肉制品民生問題，非洲豬瘟檢測大力推廣也將會是勢在必行。

利用PCR熒光探針法測非洲豬瘟ASFV的試劑盒

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