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公司名稱(chēng):廣州健侖生物科技有限公司
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河豚毒素定量酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒

河豚毒素定量酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒

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本測(cè)試盒用直接競(jìng)爭(zhēng)免疫分析法定量測(cè)定河豚魚(yú)中的河豚毒素(TTX)。該測(cè)試盒反應(yīng)孔可拆卸,可測(cè)單份樣品,也可測(cè)多份樣品。定量分析時(shí)需有含450nm波長(zhǎng)的微孔板酶標(biāo)儀。

  • 產(chǎn)品描述

本測(cè)試盒用直接競(jìng)爭(zhēng)免疫分析法定量測(cè)定河豚魚(yú)中的河豚毒素(TTX)。該測(cè)試盒反應(yīng)孔可拆卸,可測(cè)單份樣品,也可測(cè)多份樣品。定量分析時(shí)需有含450nm波長(zhǎng)的微孔板酶標(biāo)儀。


1 概要

河豚魚(yú)是近海底棲居的肉食性有毒海產(chǎn)魚(yú)類(lèi),其內(nèi)臟有毒。其毒性物質(zhì)主要是河豚毒素,河豚毒素是一種劇烈的神經(jīng)毒素,其性質(zhì)穩(wěn)定,加熱、鹽腌及高溫烹煮均不能使其破壞,其毒性比晴化鈉大1000倍。因誤食或食用加工不當(dāng)?shù)暮与圄~(yú)而發(fā)生人畜中毒的事件每年都有發(fā)生。故準(zhǔn)確檢測(cè)河豚魚(yú)中的河豚毒素對(duì)預(yù)防和控制河豚毒素中毒,具有重要意義。本檢測(cè)方法具有靈敏、快速、簡(jiǎn)便、特異性好、取樣量小、不破壞魚(yú)體結(jié)構(gòu),并可同時(shí)檢測(cè)大量樣品等優(yōu)點(diǎn)。

 

2 測(cè)定原理

本測(cè)試盒利用固相酶聯(lián)免疫吸附原理,采用直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法進(jìn)行測(cè)定。用抗原包被微孔板,加入河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、抗河豚毒素酶標(biāo)單克隆抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)后,加入底物顯色,終止液終止后,用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)定OD值。


3 提供的物品

微孔板

5個(gè)濃度的TTX標(biāo)準(zhǔn)溶液(各1mL)

標(biāo)準(zhǔn)1:0ng/mL    …………………………………………………………直接使用

標(biāo)準(zhǔn)2:5.0ng/mL ……………………………………………………………直接使用

標(biāo)準(zhǔn)3:20.0ng/mL       …………………………………………………直接使用

標(biāo)準(zhǔn)4:50.0ng/mL       …………………………………………………直接使用

標(biāo)準(zhǔn)5:200.0ng/mL     …………………………………………………直接使用

抗TTX抗體溶液(6mL)       …………………………………………………直接使用

顯色液(12mL)       ……………………………………………………………直接使用

終止液(6mL) ………………………………………………………………………直接使用

濃縮洗液(30mL)   …………………………………………………………………稀釋使用


4 盒中未提供,需自備物品

微孔板酶標(biāo)儀(含450nm)、振蕩器、粉碎機(jī)、微量移液器

量筒、漏斗、容量瓶、快速定性濾紙

乙酸、甲醇(分析純)、去離子水或蒸餾水






5 操作者注意事項(xiàng)

    標(biāo)準(zhǔn)溶液中含有TTX毒素,應(yīng)特別小心。

終止液為1N硫酸,避免接觸皮膚。

每次加樣后立即將所有試劑放回2~8 ℃。

每步加樣時(shí)間應(yīng)控制在5min內(nèi)。

孵育過(guò)程中應(yīng)避光。

不要使用過(guò)期試劑盒。

    不要交叉使用不同批號(hào)的試劑盒中的試劑。


 

6 儲(chǔ)存條件

     保存試劑盒于2~8。不要冷凍

     顯色液對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

     將不用的微孔板放進(jìn)原鋁箔袋中,置2~8保存。


7 試劑變質(zhì)的標(biāo)志

      標(biāo)準(zhǔn)1的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。


8 樣品處理

----樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存;

----稱(chēng)取5g河豚魚(yú)樣品(肌肉、皮或內(nèi)臟),剪碎,組織勻漿器打碎,加入25mL 0.1%的乙酸,在電爐上煮沸攪拌10min。

----待冷卻至室溫后,3000rpm離心10min。

----上清用快速定性濾紙過(guò)濾于125mL分液漏斗中。

----沉淀加入20mL0.1% 乙酸,再煮沸3min,重復(fù)步驟3~4。

----加入等體積乙迷脫脂,靜置分層,放出水層至另一分液漏斗中,再重復(fù)脫脂1次。

----將水層放入50mL量筒中,用0.1%乙酸定容至40mL,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

----測(cè)定時(shí)取1mL提取液,用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6.5-7.0,立即用于檢測(cè)。


9 酶免疫分析程序

----濃縮洗液為10倍濃縮液,使用時(shí)與去離子水或蒸餾水按體積比1:9稀釋后使用。

    ----取所需數(shù)量的板條插入微孔架,記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)的位置。

    ----加入50mL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到微孔,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。

----加入50mL抗TTX抗體溶液到每個(gè)微孔(注意移液器管尖不要接觸到孔中的液體,避免交叉污染)中,37℃孵育90min。

----甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板3min×3次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。

    ----每孔加入顯色液100mL(2滴),37℃孵育10min。

    ----每孔加入終止液50mL(1滴),立即用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450nm處測(cè)定吸光度值(OD值)。


10 樣品濃度計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)溶液OD值與標(biāo)準(zhǔn)1OD值的比值為縱坐標(biāo),所對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(ng/mL)的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo),制作校正曲線。根據(jù)樣品OD值與標(biāo)準(zhǔn)1OD的比值,可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為T(mén)TX濃度的對(duì)數(shù)值,求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中TTX濃度C(ng/mL),按下列公式計(jì)算出樣品中TTX含量:

TTX含量(mg/kg)= C×K

式中:C:稀釋后樣品提取液中TTX含量(ng/mL)

            K:樣品稀釋倍數(shù)(本提取方法為8)

 

11 主要技術(shù)指標(biāo)及參數(shù)

11.1 zui低檢出濃度5.0 ng/mL。

11.2 加標(biāo)回收率在70-120%,條內(nèi)變異系數(shù)<10%,條件變異系數(shù)15%。

11.3 線性范圍:5.0~200.0ng/ml。


附圖(僅供參考)

                             

                  TTX濃度(ng/mL)對(duì)數(shù)值

                           

                              TTX校正曲線



【公司名稱(chēng)】 廣州健侖生物科技有限公司

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